柑橘根系丛枝菌根（AM）真菌染色方法
1. 取保存于FAA固定液[福尔马林(38%甲醛)5mL+冰醋酸5mL +70%酒精90mL］的脐橙根系，清水冲洗干净，并将水分控干。
2. 透明: 将脐橙根系剪成约25px长，放入组织包埋盒中，加入 20% KOH 溶液完全浸泡根系，90℃水浴0.5 h，清水冲洗3次并将水分控干。
3. 脱色: 加入碱性H2O2（10% H2O2 10 mL +氨水1 mL+蒸馏水189 mL）室温脱色2h，脱色结束后用清水冲洗3次并将水分控干。
4. 酸化:加入5%的冰乙酸室温酸化2h，倒掉冰乙酸溶液。
5. 染色:加入派克标准纯黑墨水配置的5%的墨水醋染液 (5%冰乙酸95mL+墨水5mL),放入66 ℃的水浴锅中水浴染色1h。
6. 褪色:染色完成后，倒去染液，并用清水漂洗数次后，用清水浸泡12 h以上脱色备用。
7. 制片、显微观察和估算
取完成染色处理的根段于载玻片上，挑出根中的坚硬组织，将剩余组织平展在载玻片上，柑桔根的皮为两层结构(外皮及内皮)，轻轻地用尖嘴镊子将外皮与内皮分开，每片平行摆放2~4个根段，盖上盖玻片，用镊子轻轻敲压使根段平展均匀。每个处理制片3张，3次重复。使用尼康Eclipse Ci-L和DS-Ri2观察和拍照。
按照BGC使用的方法测定菌根侵染率：在显微镜下检查每条根段的侵染情况，如菌丝、泡囊、丛枝等，逐段打分（最低分为0，以10%分为一级，最高分为100%。没有菌根结构的根段为0，若该根段只有一半长度被侵染则为50%，若该根段全部被侵染记为100%，以此类推），记录不同分值的根段条数，各分值根段条数与其分值乘积之和除以观察根段总数，即为该样品的侵染率。参考公式：侵染率=（∑分值×该分值根段数)/观察根段总数。
参考文献：五种染色剂对枳砧‘纽荷尔’脐橙根系AM真菌染色效果的比较.pdf
