甘蔗根系丛枝菌根（AM）真菌染色方法

1.将新鲜采集的甘蔗根系用自来水冲洗干净，或将保存于50 %乙醇或FAA（固定液）的甘蔗根系，冲洗后剪成25px长的根段，置于组织包埋盒中。

2.透明:用20%的KOH浸没，放入90℃的水浴锅内，水浴90～120min，以除去根部皮层细胞中的细胞质，便于以后的染色中染料能够尽快渗透。倒去KOH，用清水漂洗数遍并将水分控干。

3.脱色: 加入碱性H₂O₂(10%H₂O₂30 mL，氨水3mL，蒸馏水567mL) 漂白60min，除去根系深褐色，同时也可以软化根系。脱色完成后用清水漂洗并将水分控干。

4.酸化:加入5%的乙酸酸化5min。

5.染色:加入派克标准纯黑墨水配置的5 %的墨水醋染液 (5%乙酸95mL+墨水5mL); 放入66 ℃的水浴锅中水浴染色30min。

6.褪色:染色完成后，倒去染液，并用清水漂洗数次后，用清水浸泡12 h以上脱色。

7.选取大小一致的根段，平行摆放于载玻片上，盖上盖玻片，用手指将根段稍用力按压。对于一些不易按压的老根，可用镊子将甘蔗根系中心的梗 轻挑出来，再进行压片。观察。

参考文献：甘蔗根系内生真菌染色方法探讨.pdf

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• 甘蔗根系内生真菌染色方法探讨_廖楠.pdf