木薯根系丛枝菌根（AM）真菌染色方法

1.将新鲜采集的木薯根系用自来水冲洗干净，保存于50 %乙醇。取出冲洗后剪成25px长的根段，置于组织包埋盒中。

2.透明:加入20%KOH溶液完全浸泡，90℃水浴30min，除去根部皮层细胞中的细胞质，利于染料浸透，清水冲洗 3~5 次并将水分控干。

3.脱色: 加入碱性H₂O₂(10%H₂O₂10 mL+氨水1mL+蒸馏水189mL) 室温脱色2h，除去根系深褐色，同时软化根系。脱色结束后用清水冲洗 3~5 次并将水分控干。

4.酸化:加入5%的冰乙酸，室温酸化5 min。

5.染色:加入派克标准纯黑墨水配置的5%的墨水醋染液 (5%冰乙酸95mL+墨水5mL); 放入66 ℃的水浴锅中水浴染色30min。

6.褪色:染色完成后，倒去染液，并用清水漂洗数次后，用清水浸泡12 h以上脱色。

7.将脱色处理后的根段平展于载玻片上，挑出根中的坚硬组织，用尖嘴镊子将木薯根外皮与内皮轻轻分开。每片平行摆放 3~4 个根段，盖上盖玻片，用镊子轻轻敲压使其平展均匀。每个处理制片3 张，3 次重复。使用尼康 Ci-L 显微镜观察、拍照。

参考文献：木薯根系丛枝菌根真菌染色方法.pdf

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